羊水细胞培养和 ，
是染色体病产前诊断的主要手段，
But
羊水中活细胞数少，
且羊水细胞培养技术要求高、
培养时间长、易污染、
所以羊水细胞培养成功率一直很低
培养成功了，
也会遇到分裂相较少，
形态不佳的问题。
不断改进的培养技术
和质量有保证的培养基
对羊水细胞培养至关重要
那 么
。
。
。
一、如何做好羊水细胞原位培养？
1. 通常取15-30ml羊水用以完成全部细胞遗传学研究。羊水量不足则可能需要延长培养时间。
2. 无菌操作将羊水均分到两支15ml离心管中。
3. 1000rpm离心10分钟。
4. 小心吸出上清液。
5. 弃去上清液。
留下的细胞沉淀
6. 用1ml BioAMF-2 重新悬浮细胞块
1ml BI羊水培养基重新悬浮细胞
7. 取35mm培养皿，在盖子上面及下半部侧壁都做好标记（包括编号，姓名等）。为便于移动和观察，将两个小培养皿放入一个90mm培养皿中操作。
8. 滴加0.5ml细胞悬液至每块盖玻片中央，用移液管尖小心摊开（注意避免流出盖玻片外）。
接种细胞
将细胞悬液摊匀在盖玻片上
轻轻放入培养箱
9. 24小时之后，给每块盖玻片补加1.1ml BioAMF-2。
10. 当克隆大小、数量合适并显示有丝分裂迹象时收获细胞（培养7天后）。
二、 如何做好原位收获？ 1. 每个培养皿（含1.6ml细胞悬液）加3滴秋水仙胺溶液，37℃孵育30min。
滴加秋水仙素
2. 从培养箱中拿出培养皿至通风橱，自此实验期间避免移动培养皿。
3. 吸弃或倾倒掉培养液（正常情况下不必担心盖玻片掉出），用吸头沿培养皿内壁缓慢加入2ml 0.48M KCl（39℃预热）至盖玻片上（避免吸头直接接触到玻片，2ml在培养皿内壁相对两个地方分两次加入）。
倾倒培养基等
沿培养皿内壁加入KCl等
4. 培养皿加盖，室温（25℃左右）下孵育30min。
5. 沿培养皿内壁缓慢加入加1ml新鲜、预冷的固定液（75%甲醇：25%乙酸）至培养皿中，加盖，室温下放置10min。（每天早上配制，4℃冰箱预冷，使用过程中随时放回冰箱）
6. 吸掉或倾倒液体，缓慢加入2ml新鲜、预冷的固定剂，加盖，室温下放置30min。
7. 吸掉或倾倒固定剂，加入2ml新鲜、预冷的固定剂。加盖，室温（25℃左右）下放置10min。
8. 吸去或倾倒固定剂，放于干燥室或化学通风橱，保持室内湿度50%-60%，可以通过加湿器控制环境湿度。
9. 此时需要标记好载玻片以便染色，载玻片必须和培养皿相对应；
标记好载玻片
10. 轻轻挤压培养皿，用针从培养皿中沿边缘轻轻挑取盖玻片，放在干净吸水纸上静置5~10min，干燥后加封片胶DPX贴于载玻片上（细胞面朝上）。注意避免盖玻片刮擦或折断等损坏。
轻轻挤压培养皿，用针挑起盖玻片
将盖玻片放在吸水纸上晾干
将盖玻片胶粘在载玻片上
11. 室温下静置2小时，直到DPX完全干燥。
12. 60℃烘箱中烘烤过夜。
13. 按要求进行染色体。
三、选择好的培养基
以色列BI生产的BIOAMF（医疗器械备案号：沪浦械备20150067号）
专门针对胎儿染色体核型分析的羊水和绒毛细胞原位培养而研发，
BIOAMF用于封闭和开放环境培养，解冻即可用，完全培养基。
缓冲效果更佳，
适用于封闭和开放培养系统，
增加细胞分裂中期产量，
有丝分裂中期染色形态更佳，条带清晰。
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