近期，默瑞生物推出现货（TwistAmp Liquid Basic kit/TwistAmp EXO kit）液态重组酶聚合酶扩增 (RPA)试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成 DNA/RNA 扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。
TwistAmp??Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行 PCR 和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种 RPA 组分比例进行实验以优化试验。
除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp? RPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的?TwistAmp? Liquid试剂盒是现场或定点试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的引物）取代 PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。
产品组成:
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TwistAmp Basic Kit（冻干态） |
TwistAmp Basic Kit(液态) NEW!!! |
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l 96 freeze-dried RPA pellets l 4 x 1 ml TwistAmp? Rehydration buffer l 1 x 250μl magnesium acetate (280mM) l 6μl of Control template l 45μl of Control primer mix |
l 50μl 20x Core Reaction Mix l 3ml 2 x Reaction Buffer l 500μl 280mM MgOAc l 550μl 10 x E-mix l 100μl of Positive control template l 45μl of Positive control oligo mix
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相关扩展试剂盒额外提供试剂:
v 100 μl 50x 外切酶 III (TwistAmp? Liquid exo/exo RT kits);
v 100 μl 50x 逆转录酶 (RT) (TwistAmp? Liquid Basic RT/exo RT kits);
v 100 μl of 阳性对照模板 (DNA with TwistAmp? Liquid exo/Basic kits, RNA with TwistAmp? Liquid Basic RT/exo RT kits);
v 45 μl of 阳性oligo mix (oligo mix consists of primers for Basic/Basic RT kits, primers plus a ?uorescently labelled exo probe in the exo/exo RT kits)
其他必需试剂(非试剂盒提供):
v ddH2O; dNTPs; 寡聚核苷酸;
产品信息:
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货号 |
品名 |
规格 |
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TALQBAS01 |
TwistAmp Liquid Basic Kit |
100 rxn以上 |
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TALQEXO01 |
TwistAmp Liquid Exo Kit |
100 rxn以上 |
附: TwistAmp liquid试剂盒Q&A
Q 20x核心反应mix有沉淀,是否影响其功能?
A在低温保存时, 重组酶和辅助蛋白在50%甘油中20x核心反应mix中有时会发生可逆的共沉淀反应.所以在室温融化混匀后离心使其返回溶液形式并不影响其功能。
Q 使用Liquid试剂盒做多重实验，能否制备master mix?
A 可以。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可以预先混合，置于冰上几个小时，在很多实例中可以过夜保存（性能上有任何改变都需要客户自行实验和评价）。一旦加入20x核心酶，短期保存在冰上也是可以的。
Q 使用Liquid试剂盒如何提高重复率和RNA模板的扩增率?
A 先将RNA模板和醋酸镁混合后加入反应体系中，RNA的三级结构会抑制逆转录酶的活性，所以加入RNA和醋酸镁时，将两者分别加到在管内壁两侧或者将醋酸酶加在管内盖中，同时离心混入体系，这种操作会提高反应性能。
Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，还能使用吗?
A 可以。少量磷酸肌酸会发生沉淀不会影响RPA反应，只需在实验前通过涡旋将沉淀重悬离心即可。
Q 在使用Liquid试剂盒时，是否能够使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?
A 可以，请参考
/10.7150/thno.15250 和 /10.1186/s13148-015-0100-6
Q 最小的RPA液体反应体系是多少?
A 最小低至PL级，请参考
/10.1371/journal.pone.0153359
Q 液体反应体系中需要加入多少dNTPs?
A 1.8mM(总)dNTPs 作为起始量即可。用户也可以根据自身实验优化浓度,有时1-12mM均适用。
Q 如何提高扩增曲线的可重复性?
A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。
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