CELL重磅！化学蛋白质组学构建人类原代T细胞半胱氨酸互作的整体图景
2020-08-10 00:00:00   来源：生物在线   评论：0 点击：

未分化T细胞（native），扩增T细胞（expanded）以及扩增后各种刺激（CD3/CD28抗体、BPK-21、BPK-25、EV-96、EV-3和EV-93）的T细胞（activated）

技术方法

TMT-exp，TMT-ABPP，isoTOP-ABPP

实验路线图

半胱氨酸反应性组学图谱检测流程与结果

2. 化学蛋白组学构建T细胞活化过程中半胱氨酸连接性图谱

通过TMT-exp、TMT-ABPP、isoTOP-ABPP组学技术对三组T细胞进行检测，在2283种蛋白质中鉴定出3466种连接半胱氨酸，这些连接半胱氨酸主要与免疫信号通路，DNA-蛋白互作，蛋白-蛋白互作等功能有关。

半胱氨酸连接性组学图谱检测流程与结果

3. T细胞功能相关小分子的筛选与靶点分析

作者对结构复杂的130种亲电小分子进行了多维筛选，以确定在低mM浓度下抑制T细胞活化而不引起细胞毒性的化合物，最终筛选出了19种。之后利用TMT-ABPP和isoTOP-ABPP方法对筛选5种小分子（BPK-21、BPK-25、EV-96、EV-3和EV-93）的蛋白靶点。

免疫相关小分子筛选与靶点分析

4. 小分子作用机制解析

通过ELISA、qPCR、WB、酶活性检测、CRISPR/Cas9基因编辑结合组学数据共同解析几种小分子不同的作用机理：EV-3介导的BIRC2和BIRC3降解；BPK-25促进NuRD复合物的降解；EV-96促进了免疫激酶的降解等。